Информация

Какъв е съставът на стандартния буфер за разредител в лептинов ELISA комплект?

Какъв е съставът на стандартния буфер за разредител в лептинов ELISA комплект?



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Опитвам се да намеря състава на буфера за разредител, използван за разреждането на човешки запас от лептин, който да се използва в ELISA анализ. Производителят на комплекта (https://www.thermofisher.com/elisa/product/Leptin-Human-ELISA-Kit/KAC2281) само посочва, че буферът съдържа 8 mM натриев азид, но не мога да намеря точния състав на буфер навсякъде в интернет.


Миеломна и хибридомна културална среда (съдържаща серум)

Среда за растеж на хибридома с хипоксантин и тимидин (съдържаща серум)


Какъв е съставът на стандартния буфер за разредител в лептинов ELISA комплект? - Биология

Пик и резултати за възстановяване

Резултати за линейност

Бележки за приложението

  • Предварително покрита 96-ямкова лентова микроплака
  • Буфер за измиване
  • Спрете решение
  • Разредител(и) за анализ
  • Лиофилизиран стандарт
  • Биотинилирано антитяло за откриване
  • Стрептавидин-конюгиран HRP
  • TMB едноетапен субстрат
  • Дестилирана или дейонизирана вода
  • Прецизни пипети за доставяне на обеми от 2 & microl до 1 & microl
  • Регулируеми 1-25 & микропипети за приготвяне на реагенти
  • 100 & microl и 1 литър градуирани цилиндри
  • Епруветки за приготвяне на стандартни и пробни разреждания
  • Абсорбираща хартия
  • Четец за микроплаки, способен да измерва абсорбцията при 450 nm
  • Дневник милиметрова хартия или компютър и софтуер за ELISA анализ на данни
  1. Подгответе всички реактиви, проби и стандарти, както е указано в ръководството.
  2. Добавете 100 µl стандарт или проба към всяка ямка.
  3. Инкубира се 2,5 часа при RT или O/N при 4°C.
  4. Добавете 100 µl приготвено биотиново антитяло към всяка ямка.
  5. Инкубира се 1 час при стайна температура.
  6. Добавете 100 µ от приготвения разтвор на стрептавидин към всяка ямка.
  7. Инкубира се 45 минути при стайна температура.
  8. Добавете 100 µl TMB едноетапен субстратен реагент към всяка ямка.
  9. Инкубира се 30 минути при стайна температура.
  10. Добавете 50 µl Stop Solution към всяка ямка.
  11. Прочетете веднага при 450 nm.

Нуждаете се от вашите резултати по-бързо? Опитайте платформата SpeedELISA на RayBiotech за количествено откриване само за три часа.


ELISA комплект за лептин (LEP)

  • Продукт № SEA084Eq
  • Видове организми Equus caballus Equine (кон) Едно и също име, различни видове.

Специфичност

Този анализ има висока чувствителност и отлична специфичност за откриване на лептин (LEP).
Не е наблюдавана значима кръстосана реактивност или интерференция между лептин (LEP) и аналози.

Възстановяване

Изброените по-долу матрици бяха обогатени с определено ниво на рекомбинантен лептин (LEP) и степента на възстановяване се изчислява чрез сравняване на измерената стойност с очакваното количество лептин (LEP) в пробите.

Матрица Диапазон на възстановяване (%) Средно аритметично(%)
серум (n=5) 88-105 95
EDTA плазма (n=5) 86-95 92
хепарин плазма (n=5) 78-101 95

Точност

Прецизност в рамките на анализа (Прецизност в рамките на анализа): 3 проби с ниско, средно и високо ниво на лептин (LEP) бяха тествани 20 пъти на една плоча, съответно.
Прецизност между анализите (Прецизност между анализите): 3 проби с ниско, средно и високо ниво на лептин (LEP) бяха тествани върху 3 различни плаки, 8 повторения във всяка плака.
CV(%) = SD/средно X100
Вътрешен анализ: CV

ПОДДАВАНЕ

НАРАЩАНЕ НА УСЛУГИТЕ

  • Еднокомпонентни реагенти от комплекта за анализ
  • Лизисен буфер, специфичен за ELISA / CLIA
  • Контрол на качеството на ELISA/CLIA
  • Персонализирано обслужване на комплекта ELISA
  • Персонализирана услуга за модел на заболяване
  • Серуми Индивидуално обслужване
  • TGFB1 Активиращ реагент
  • Експериментална услуга за PCR в реално време
  • стрептавидин

Блокиране на буфери

Блокирането е критична стъпка за ELISA и има редица налични опции. Изборът на правилния блокиращ буфер увеличава чувствителността чрез намаляване на неспецифичното свързване и фоновия шум.

Блок асо (BUF029)

Превъзхождащ 1% BSA, Block Ace е високоефективен блокиращ буфер, който може да се използва и като буфер за промиване и за разреждане на антитела. В сравнение с BSA, Block Ace осигурява намален фон и по-резки стандартни криви.

BSA блок (BUF032)

Минимизирайте неспецифичното свързване в сандвич и антиген-надолу ELISA, като използвате BSA Block. Базиран на BSA, този буфер има собствен протеинов стабилизатор, който създава дългосрочна стабилна среда за покриване на антигени или улавяне на антитела.

Ултраблок (BUF033)

Буфер, съдържащ патентовани протеини от не бозайници от риби, предназначени да намалят неспецифичното свързване. С допълнителна сила на блокиране, той е подходящ за използване в антиген-надолу и сандвич ELISA с висок фон и при работа с човешки, говежди и свински серумни проби. Ultrablock може да покрие неспецифични места на свързване, които са пространствено недостъпни за традиционните блокери.

Synblock (BUF034)

За максимална сила на блокиране използвайте Synblock, нова непротеин блокираща формулировка за покрити с антитяло и сандвич ELISA. Този синтетичен, инертен блокиращ агент осигурява максимално намаляване на смущенията и елиминира неспецифичния фонов шум.


Публикации в блога

Обикновено използваме стабилизатор за предварително покрити плочи. Допълнителната стъпка на измиване е предназначена да премахне тези компоненти преди да започнете анализа. Ако не извършите измиването, ефектът върху ефективността на анализа е незначителен.

Какви клонове на антитела се използват във вашите ELISA комплекти?

Информацията относно клоновете на антителата, използвани в нашите комплекти, е собствена. Въпреки това, клоналността (поликлонална или моноклонална) и видовете гостоприемници на антителата могат да бъдат предоставени при поискване.

Трябва ли да използвам серумни или плазмени проби за моя ELISA експеримент?

Това зависи от това какви цели анализирате и от спецификата на вашето проучване. В идеалния случай препоръчваме да се определи разликата между серум и плазма за целите от интерес и да се вземе решение за типа проба, която да се използва за количествено определяне. В зависимост от целите може да има разлика в концентрациите на целите между серум и плазма. Най-важният фактор при приготвянето на плазмени или серумни проби е последователността при подготовката, за да се гарантират прецизни измервания. Като цяло пробите от плазма/серум не трябва да съдържат частици, да не съдържат излишни липиди и да нямат хемолиза.

Тези видове замърсители ще допринесат за фона и ще повлияят неблагоприятно на прецизността на анализа. Ключът е да приготвяте пробата по един и същи начин всеки път. Тоест, центрофугиране на проби със същата скорост, за същото време, отстраняване на серума или плазмата веднага след центрофугиране и аликвотиране и замразяване на пробите по едно и също време. Избягвайте повтарящи се цикли на замразяване и размразяване.

Моята проба може да има много ниски нива на аналити. Какви методи мога да използвам за подобряване на откриването?

За нашите формати LEGEND MAX&trade и ELISA MAX&trade Deluxe препоръчваме да следвате предоставения протокол. Не можем да гарантираме ефективността на комплекта, ако има отклонения от протокола. По-долу са общи предложения, ако използвате нашия формат ELISA MAX&trade Standard:

  • Контролирайте фоновия шум чрез увеличаване на броя на измиванията и времето за накисване между измиванията.
  • Контролна точност на анализа. Например, бъдете по-внимателни и по-последователни в пипетирането си, използвайте свежи хартиени кърпи за плочи за потупване, за да избегнете замърсяване с авидин-HRP и да увеличите обема на измиване.
  • Увеличете времето на инкубация. Имайте предвид, че това обикновено също увеличава фона, така че чувствителността на анализа може да не се увеличава непременно.
  • Концентрирайте пробата си, ако е възможно.
  • Използвайте метод за напасване на логистична крива с пет параметъра, за да изчислите по-точно концентрацията на пробата в долния край на стандартната крива.

В много случаи пробата може просто да съдържа много ниски до неоткриваеми нива на аналита. Без значение как манипулирате анализа, все още може да не успеете да получите откриваеми концентрации.

Изчерпахме антитялото за улавяне/откриване в нашия комплект ELISA. Можем ли да използваме самостоятелно/единично антитяло, за да го заменим?

Не, не препоръчваме използването на самостоятелни реагенти за подмяна на компоненти на комплекта и не можем да гарантираме ефективността на комплекта, ако замените или комбинирате реагенти от различни комплекти/производители.

Колко проби мога да използвам с вашия комплект?

Това ще зависи от това дали вашите проби се анализират в два или три екземпляра. Например, след като добавите стандартите, можете да стартирате 80 проби без повторения или 40 проби в два екземпляра и т.н.

Как трябва да се съхраняват плочите след нанасяне на покритие?

Ако плочите с покритие не могат да се използват веднага, те трябва да бъдат запечатани и съхранявани за една нощ при 4°C.

Имам няколко LEGEND MAX™ ELISA комплекта, които искам да изпълнявам едновременно. Мога ли да използвам един и същ буфер за измиване за всички комплекти?

Буферът за измиване, предоставен във всички наши комплекти LEGEND MAX&trade, е един и същ и номерата на частите на бутилките с буфер за измиване в тези комплекти трябва да са идентични. За комплектите ELISA MAX&trade Deluxe и ELISA MAX&trade Standard, ние предоставяме рецепта за буфера за измиване във всеки технически информационен лист за комплект и rsquos. Тази рецепта е една и съща за всички комплекти ELISA MAX&trade.

Използвам биотина и пречистените формати на същия клонинг на антитяло, за да се опитам да настроя собствен ELISA, но не успявам.

Ако използвате един и същ клонинг както за откриване, така и за улавяне на антитела, епитопът може вече да е зает от едно от антителата и да предотврати свързването на другото. Препоръчваме да изберете различни клонинги за вашите антитела за улавяне и откриване.

Къде мога да намеря съвети за отстраняване на неизправности при ELISA анализи?

Кога трябва да използвам LEGEND MAX™ ELISA комплекти с предварително покрити плочи?

Комплектите LEGEND MAX&trade са готови за употреба, проектирани за лесна употреба и минимизират изискванията за покриване на ELISA плаките и приготвяне на буферни разреждания. Препоръчваме LEGEND MAX&trade комплекти за потребители, които са нови в ELISA.

Какъв вид буфер за покритие трябва да използвам за моя ELISA?

Като цяло препоръчваме използването на PBS (pH 7,4) или карбонатен буфер (pH 9,5). Точният буфер за покритие, който изберете, може да зависи от открития цитокин.

Защо не препоръчваме използването на азид в ELISA буфери?

Азидът е необратим инхибитор на HRP.

Каква е чувствителността на вашите ELISA комплекти?

Ако използвате формат LEGEND MAX&trade или ELISA MAX&trade Deluxe, моля, консултирайте се с ръководството за отделни комплекти и rsquos за повече информация относно чувствителността. Ние не предоставяме тази информация за стандартните комплекти ELISA MAX&trade, но на теория тя трябва да съвпада с тази на формата ELISA MAX&trade Deluxe, ако използвате всички реагенти BioLegend&rsquos.

Какъв е срокът на годност на продуктите BioLegend ELISA?

Комплектите BioLegend's LEGEND MAX&trade са с гаранция за 3 месеца от датата на получаване. Комплектите ELISA MAX&trade са с гаранция за 12 месеца от датата на получаване. За специфичен за партидата срок на годност вижте етикета на кутията на всеки продукт.

Мога ли да използвам рекомбинантния стандарт, предоставен с комплекта за биоанализ?

Не, не препоръчваме използването на стандарта за рекомбинантен протеин за други приложения. Включените в комплекта протеинови стандарти са калибрирани за използване като ELISA стандарт и не са тествани за биоактивност. Освен това, ELISA протеиновите стандарти може да съдържат други протеини носители и да не са преминали същото тестване за стерилност като нашите биоактивни рекомбинантни протеини.

Мога ли да използвам стерилни плаки за тъканна култура за ELISA?

Не. Плаките за тъканни култури са предназначени за целите на клетъчната култура и обикновено нямат висок капацитет за свързване на протеини. За ELISA препоръчваме използването на високо протеин-свързващи плаки, като Nunc Maxisorp&trade plates (кат. № 423501).

Мога ли да използвам антитялото за улавяне и откриване, предоставено като част от комплект ELISA за други приложения, като оцветяване с поточна цитометрия?

Антителата, използвани в нашите ELISA комплекти, са валидирани за тяхното използване в ELISA анализи и не можем да гарантираме, че ще работят в други приложения, като поточна цитометрия. Вместо това ви препоръчваме да използвате валидирани с поточна цитометрия антитела за тези експерименти.

Мога ли да използвам вашите ELISA комплекти за моите тъканни проби?

Като цяло продуктите BioLegend&rsquos ELISA могат да се използват за тъканни или клетъчни екстракти/хомогенати, стига пробите да са приготвени по такъв начин, че да са съвместими с имунореактивност. За целта препоръчваме да използвате следните насоки:

  • Тъканите/клетките трябва да се лизират или хомогенизират в неутрален pH буфер, който не съдържа денатуриращи химикали (като урея, тиоурея, SDS).
  • Без или минимални нива на почистващ препарат (като SDS, Triton&trade X-100).
  • Няма прекомерна йонна сила (концентрация на сол, по-висока от физиологичната йонна сила).
  • Буферите трябва да съдържат достатъчно коктейли с протеазни инхибитори, за да запазят целевите протеини от протеолитично разграждане от ензими, освободени от клетките.

Не препоръчваме повторно използване на мостри. За точни резултати пробите трябва да се разделят на аликвоти и да се съхраняват само за еднократна употреба. Ако решите да използвате повторно проба, ще трябва да извършите допълнителни експерименти за валидиране, за да сте сигурни, че можете да получите точни показания. Това би било повлияно от редица фактори, включително стабилността на пробата.

Мога ли да използвам вашите съчетани двойки антитела ELISA с протеинов стандарт от друга компания?

Ако антителата са предоставени като част от комплект, ние не препоръчваме комбиниране на реагенти от различни комплекти ELISA. Не можем да гарантираме ефективността на комплекта, ако комбинирате реагенти от множество комплекти или производители. Ако сте закупили отделни антитела и разработвате свой собствен ELISA, това може да е възможно, но ще трябва да бъдете тествани. Антителата може да не разпознават или да покажат слабо свързване към протеиновия стандарт, ако имуногенът, използван за генериране на тези антитела, е различен от протеиновия стандарт по отношение на последователност или структура.

На каква стъпка мога да отложа процедурата си ELISA за няколко дни? Мога ли да замразя чиниите си за по-късна употреба?

Най-добре е да следвате препоръчания протокол без допълнителни забавяния. Въпреки това, ако искате да спрете експеримента, бихме препоръчали да отложите процедурата на етапа на блокиране (след покриване с улавящото антитяло). Можете да добавите 200 &muL блокиращ буфер в ямките и да държите плаките за една нощ при 4°C (минимална или никаква загуба на сигнал) или замразени при -20°C за няколко дни (това може да има някакво влияние върху сигнала). Отлагането на процедурата при първата стъпка (покриване с улавящо антитяло след 16-20 часа при 4°C) не е препоръчително, защото може да доведе до висок фон.

Изчерпах някои компоненти на ELISA комплекта, мога ли да ги купя отделно?

Възможно е да закупите някои компоненти на комплекта поотделно. Моля, свържете се с нашата техническа сервизна група и предоставете информация за партидата на комплекта и неговите компоненти, за да определите дали това е осъществимо.

Мога ли да смесвам реагенти от различни комплекти ELISA MAX™ или да ги използвам за други приложения?

Това не се препоръчва. Реагентите ELISA MAX&trade са оптимизирани за определена партида и не са тествани за качество за приложения, различни от ELISA.

Може ли покритието с улавящо антитяло да се извършва за повече от една нощ?

Обикновено се препоръчва нанасяне на покритие за 16-20 часа при 4°C. По-продължителното време на инкубация може да увеличи количеството на улавящото антитяло, свързано с плаките, и това може да увеличи фоновия шум.

Мога ли да добавя допълнителен стандарт в горния край на стандартната крива, за да изчисля по-висока концентрация на аналита?

Ние не препоръчваме тази практика. Чувствителността на комплекта зависи от отделните компоненти и тяхното колективно валидиране като комплект и няма да се промени чрез добавяне на допълнителни точки към стандартната крива.

Мога ли да добавя допълнителен стандарт в долния край на стандартната крива, за да подобря чувствителността на моя анализ?

Въпреки че това може да е възможно, може да се окажете със сигнално плато при по-високи концентрации на стандарта. Обикновено се препоръчва да се използва диапазонът на концентрация, препоръчан в ръководството за потребителя.

Фенолно червено в средата пречи ли на ELISA анализ?

Не, фенол червено в среда за клетъчна култура няма да попречи на показанията от ELISA анализ.

За някои от вашите комплекти ELISA, защо моите серумни проби изискват разреждане с буфер за анализ?

В някои случаи е необходимо разреждане с буфер за анализ, за ​​да се сведе до минимум разликата в матрицата между пробите и стандартите, за да се постигне по-добра точност.

Как мога да получа по-добър сигнал и чувствителност за моя ELISA анализ?

&bull Увеличете времето за инкубиране (с проби, антитела за откриване или авидин-HRP или TMB субстрат). Моля, имайте предвид, че това може също да увеличи фона във вашия анализ и може да не увеличи чувствителността.
&bull Разклатете плаките по време на етапите на инкубация.
&bull Уверете се, че стандартът е напълно възстановен преди употреба.
&bull Повишено измиване и накисване между измиванията за допълнително намаляване на фона.
&bull Ако е възможно, прочетете пластината при 450-570 (или най-близкото) nm за изваждане на фона.
&bull Подобрете дублирания CV% чрез контролиране на грешката при пипетиране или измиване с по-голям обем промиващ буфер.
&bull Използвайте 5-PL или 4-PL метод за напасване на крива, а не линейна крива. Това обикновено се извършва със софтуер за монтиране на кривата и осигурява по-добро изчисление в долния край на кривата.

Каква е разликата между вашите ELISA комплекти и комплекти?

Основните разлики между тези комплекти са реагентите, включени в комплекта или комплекта.

LEGEND MAX&trade: Напълно валидирани и готови за употреба комплекти. Те съдържат всички необходими реагенти, включително 96-ямкова лентова плоча, предварително покрита с улавящо антитяло.

БЪРЗ МАКС&търговия: намалете времето за анализ до по-малко от 90 минути. Всеки комплект е напълно валидиран и съдържа 96-ямкова лентова плоча, която е предварително покрита, за да имобилизира улавящото антитяло.

ELISA MAX&trade Deluxe: По-рентабилен вариант, който включва повечето буфери, предварително титрирани антитела, рекомбинантен стандарт и субстрат. Плочите не са включени в този комплект и трябва да бъдат закупени отделно.

ELISA MAX&trade Standard: Осигурява основните компоненти за завършване на ELISA, включително стандарт за рекомбинантен протеин, антитела за улавяне и откриване и Avidin-HRP. Този комплект изисква известна оптимизация и е идеален за тези, които искат да разширят бюджета си, като предоставят свои собствени буфери и плочи.

Комплектите ELISA MAX™ Deluxe идват ли с чинии?

Не, комплектите ELISA MAX&trade Deluxe не се предлагат с чинии. Буфер за покритие и разредител за анализ (за блокиране и разреждане) са включени в тези комплекти. Плочите могат да се поръчат отделно (кат. № 423501), а инструкциите за покриване на плочите са в ръководствата за комплекти&rsquo за продукти.

Мога ли да използвам различни компоненти от различни компании за моя ELISA?

Различните производители често използват различни клонове на антитела в своите комплекти. Специфичността на антителата отчасти диктува колко сигнал се открива.

Освен това, различни комплекти могат да използват рекомбинантни протеинови стандарти, които са експресирани и пречистени с помощта на различни методи. Например, рекомбинантните протеини, експресирани в Е. coli, могат да покажат различна имунореактивност, главно поради несъответствия при повторно нагъване. Стандартите за комплекти се произвеждат и калибрират спрямо различни референции между производителите, което затруднява сравняването на компоненти от различни комплекти. Всеки комплект BioLegend ELISA е разработен и валидиран с концентрации на реагенти и протоколи, оптимизирани за аналитична стабилност. Всякакви промени в реагентите (стандарти, антитела, съвпадащи матрици) и протоколите ще повлияят на крайната ефективност на анализа.

Защо концентрациите на цитокини в моята проба са различни при използване на комплекти LEGEND MAX™ спрямо други комплекти ELISA?

Много е трудно да се получат точно еднакви концентрации на пробата при нива на pg/ml, когато се сравняват различни комплекти цитокини от различни доставчици, отчасти, защото доставчиците могат да използват различни реагенти (включително клонове на антитела), които имат различна имунореактивност спрямо целевия протеин. Не е необичайно концентрацията на цитокини да варира няколко пъти между комплектите.

Като цяло, особено за тези цитокини в диапазони pg/mL, е по-важно да има съвпадащи биологични тенденции, вместо да съвпадат абсолютно концентрации. Това означава, че един и същ цитокин, измерен от различни комплекти от различни доставчици, трябва да показва същия модел на биологични промени за съответните лечения.

Каква е очакваната концентрация на конкретен аналит в биологични проби (например в серумни проби на нелекувани животни или нормални хора)?

Тъй като всяка проба е уникална, е трудно да се предвиди, тъй като това може да зависи от подготовката на пробата и естеството на аналита. Ако използвате LEGEND MAX&trade Kit, моля, вижте съответното ръководство за повече информация.


Какъв е съставът на стандартния буфер за разредител в лептинов ELISA комплект? - Биология

Western blotting е добре установена техника, използвана в молекулярната биология за откриване на специфични протеини от сложна смес от протеини, извлечени от тъкан или клетки. Създават се синтетични или животински антитела, които реагират със специфичен целеви протеин. Материалът на пробата се подлага на протеинова денатурация, последвана от гел електрофореза. След това мембраната за електрофореза се промива в разтвор, съдържащ специфичното антитяло. След това излишното антитяло се отмива и се добавя вторично антитяло, което реагира с първото антитяло. Чрез различни методи като оцветяване, имунофлуоресценция и радиоактивност, вторичното антитяло може да позволи визуализация на протеина.

А. приготвяне на пробата

1. Екстракция на протеин

Подобрен върху основния RIPA буфер, съдържащ протеазни инхибитори и фосфатазни инхибитори.

Класическата формула е подходяща за повечето имунологични експерименти на взаимодействие протеин-протеин

Протеинът от лизата е активен и запазва свойствата и функциите си правилно. Подходящ е за съвместен IP. Разцепването на протеина при неденатурационно състояние, продуктът запазва протеиновите характеристики и функции до максималната степен, в която е подходящ за ко-IP.

Забележка: Реактивът за екстракция на протеини, съдържащ детергент, не е подходящ за Bradford As s ay Kit (PC0010). Моля, изберете комплект за анализ на BCA протеин (PC0020) или комплект за анализ на протеин Lowry (PC0030).

2. Измерване на концентрацията на протеин

Съдържанието на протеин ще се определи чрез сравняване на абсорбцията на пробата с коефициента на абсорбция, определен от стандартна крива. Стандартна крива се изготвя чрез начертаване на абсорбцията на проби, съдържащи известни концентрации на стандартния протеин.

Изборът на метод за количествено определяне на протеина трябва да вземе предвид влиянието на фактори като структура на протеина (стандартен протеин) и интерфериращи вещества в протеиновия разтвор.

M измерено при 595 nm. Нисък коефициент на интерференция, т. Определянето не е нарушено от Трис, въглехидрати, глицерол, β-меркаптоетанол, амоняк, EDTA и др.

M измерено при 562nm.  определянето не е нарушено от перилен препарат .

M измерено при 650nm. Този комплект е подходящ за проби с високо съдържание на липиди. В определен диапазон не се влияе от препарат

Б. Процедура на WB експеримент

1. гел П репарация

а. Пригответе разделителен гел според молекулното тегло на протеина. Разклатете бавно, за да се смеси напълно, избягвайте кислорода при силно разклащане. Изсипете смесения гел между две стъклени стъкла, инжектирайте безводен етилов алкохол над него, за да избегнете влиянието на кислорода върху полимеризацията.

Концентрация на разделителния гел (%)

б. Пригответе гел разтвор (Изберете някоя от следните две опции)

Таблица за приготвяне на гел P 1

4 × разделителен буфер (PH8.8)

30% разтвор на акриламид/бис, 29:1

Таблица за подготовка на гел P 2

30% разтвор на акриламид/бис, 29:1

За ваше удобство, нашият комплект за приготвяне на гел SDS-PAGE (P1200) и комплект за приготвяне на гел Tris-Tricine-SDS-PAGE (P1320), включително всички реагенти за приготвяне на гел.

За да ви спестим време, ние предоставяме Precast-Gel, за да пропуснете стъпката за приготвяне на гела и да извършите директно електрофореза.

1) Нашият готов гел е подходящ както за електрофореза с денатуриращ гел, така и за електрофореза с неденатуриращ полиакриламиден гел.

2) В сравнение с Tris-Gly Precast-Gel, Tris-Hepes Precast-Gel може да работи с по-ясни ленти и по-висока разделителна способност.

3) Моля, пригответе електрофоретичния буфер, използвайте предоставената мощност, не предлагайте да използвате буфера Tris-Gly.

Буферът за зареждане се използва както за Native-PAGE (P1017, P 1027), така и за SDS-PAGE (P1015, P1016, P1017, P1018), което ще отговаря на всичко, от което се нуждаете.

Имаме също протеинови маркери с различни спецификации и употреби за вашите нужди.

1) Всички тези три метода са подходящи за оцветяване с гел.

2) Методът за оцветяване със сребро (G7210) е по-чувствителен от метода Coomassie Brilliant Blue (P1300 & P1305), подходящ е за проби с ниска концентрация на протеин.

3) P1300 има по-кратко време за оцветяване от P1305

Прехвърлянето на протеини или нуклеинови киселини към микропорьозни мембрани се нарича "блотиране" и този термин обхваща както "зацапване" (ръчно отлагане на проба), така и трансфер от равнинни гелове. Протеините, които се разделят на SDS-PAGE, обикновено се прехвърлят към адсорбентни мембранни подложки под въздействието на електрически ток в процедура, известна като Western blotting (WB) или протеиново блотиране.

Системата за откриване на Western blot включва също HRP-конюгирани вторични антитела и хромогенен агент. Sola r bio предоставя реагенти и комплекти за DAB и ECL.

P0012 Ponceau S Solution,10× може да се използва за откриване на ефективността на мембранния трансфер, особено за NC мембраната.

Ние предоставяме буфер за изчистване (SW3020), който може напълно да направи мембраната чиста и да може да тества друго антитяло в същата мембрана.

Буферът за отстраняване може да изтрие антитялото, без да засяга антигена в мембраната. Всъщност моделът на мембраната, типът и концентрацията на антитялото и свойствата на антигените имат значение за ефективността на елуиране.

Забележка: Подходящ за западно откриване на ECL и подобни хемилуминесцентни реагенти. Не е подходящ за Western откриване с нехемилуминесцентни реагенти като DAB, NBT/BCIP.


ELISA комплект за аспартат аминотрансфераза (AST)

  • Продукт № SEB214Ra
  • Видове организми Rattus norvegicus (плъх) Едно и също име, различни видове.

Специфичност

Този анализ има висока чувствителност и отлична специфичност за откриване на аспартат аминотрансфераза (AST).
Не е наблюдавана значима кръстосана реактивност или интерференция между аспартат аминотрансфераза (AST) и аналози.

Възстановяване

Изброените по-долу матрици бяха обогатени с определено ниво на рекомбинантна аспартат аминотрансфераза (AST) и степента на възстановяване се изчислява чрез сравняване на измерената стойност с очакваното количество аспартат аминотрансфераза (AST) в пробите.

Матрица Диапазон на възстановяване (%) Средно аритметично(%)
серум (n=5) 98-105 101
EDTA плазма (n=5) 91-99 96
хепарин плазма (n=5) 84-92 88

Точност

Прецизност в рамките на анализа (Прецизност в рамките на анализа): 3 проби с ниско, средно и високо ниво на аспартат аминотрансфераза (AST) бяха тествани 20 пъти на една плоча, съответно.
Прецизност между анализите (Прецизност между анализите): 3 проби с ниско, средно и високо ниво на аспартат аминотрансфераза (AST) бяха тествани върху 3 различни плаки, 8 повторения във всяка плака.
CV(%) = SD/средно X100
Вътрешен анализ: CV

ПОДДАВАНЕ

НАРАЩАНЕ НА УСЛУГИТЕ

  • Еднокомпонентни реагенти от комплекта за анализ
  • Лизисен буфер, специфичен за ELISA / CLIA
  • Контрол на качеството на ELISA/CLIA
  • Персонализирано обслужване на комплекта ELISA
  • Персонализирана услуга за модел на заболяване
  • Серуми Индивидуално обслужване
  • TGFB1 Активиращ реагент
  • Експериментална услуга за PCR в реално време
  • стрептавидин

ELISA: Речник на термините

Ръководството за основи на ELISA съдържа точното количество подробности, за да ви помогне да планирате експеримента си и да постигнете успешен ELISA.

адсорбция - пасивното прикрепване на течност към твърда повърхност, създавайки тънък филм.

антиген - вещество, протеин, химично съединение или вирус, който е в състояние да предизвика имунен отговор, срещу който се издигат антитела.

AP (алкална фосфатаза) - фосфатазен ензим, който премахва фосфатна група от субстрат. В ELISA субстратът е p-NitroPhenyl Phosphate (pNPP).

Разредител за анализ (вижте също буфер) - буферен разтвор, в който се разрежда пробата за анализ.

чувствителност на анализа - мярка за способността на ELISA да прави разлика между малки промени в концентрацията.

Заден план - отчитането на сигнала, отнасящо се до всички реагенти, с изключение на аналита. Трябва да е ниско.

Блокиране - прилагане на реагенти, обикновено буфери, за понижаване на фона чрез свързване към потенциалните неспецифични свързващи места на антитела и ензимни конюгати.

буфер - разтвори, съдържащи съединения, обикновено протеини, за намаляване на неспецифичното свързване на антитела, използвани при блокиране за намаляване на фона.

Кръстосана реактивност - антитяло, свързващо се с мишена, която е много подобна, но не и предвидения целеви аналит, т.е. тясно свързана молекула със структурни сходства с целевия антиген.

Граница на откриване - най-малкото количество аналит, което може да бъде надеждно измерено чрез ELISA анализа, често се настройва на 2 стандартни отклонения (2 SD) над фоновото ниво.

разреждане - добавяне на буфер към протеинов разтвор, за да го направи по-малко концентриран, използва се за оптимизиране на концентрацията на антитела, но също така се прилага към проби за получаване на показания в рамките на динамичния диапазон на анализа.

Динамичен обхват - диапазон в ELISA, в който показанието на абсорбцията се увеличава в линеен режим и аналитът може да бъде надеждно измерен.

Ефект на ръба - резултат от несъответствия в производството на ELISA многоямкови плаки или когато условията на анализа, като подреждане на плочи, причиняват различно поведение на външните ямки. В резултат на това във външните кладенци могат да се появят неочаквани стойности, които може да не са в съответствие със съседните кладенци. Това може най-добре да се контролира чрез използване на дубликати или три екземпляра за всички проби и отбелязване на големи вариации в резултатите за дадена проба.

Хетерофилна интерференция - произтича от антитела, открити в пробата, анализирана чрез ELISA, тя се свързва от тези антитела с антитялото за откриване, използвано в анализа. Най-известният пример за хетерофилна интерференция е HAMA (човешко анти-миши антитяло), открит при някои пациенти, където пречи на точното определяне на аналита, показвайки фалшиво положителни показания.

HRP (пероксидаза от хрян) - ензим, който разгражда водородния пероксид до вода и пероксидаза. Хромогенни субстрати като TMB служат като индикатори за тази ензимна активност.

Ефект на куката - причинено от много високи нива на антиген в пробата. В резултат на това специфичното свързване на антигена от антитялото е недостатъчно, за да съответства на нивата на аналита и сигналът е по-нисък от очакваното. Най-добрият начин да избегнете този проблем е да тествате няколко разреждания на всяка проба.

Имуноанализ - всеки тип анализ, който използва антитела за измерване на концентрацията на аналита в проба.

смущения - ефекти върху имуноанализа, които пречат на точното измерване на аналита (например матричен ефект, хетерофилна интерференция).

Матричен ефект - ефектът на съединенията в пробата върху измерването на аналита.

pNPP (пара-нитрофенилфосфат) - колориметричен субстрат за алкална фосфатаза, той се утаява като жълто вещество.

Протеинови стабилизатори - реагенти, които подпомагат поддържането на естествената структура на протеините по време на адсорбция към повърхността на анализа.

субстрат - съединение като pNPP и TMB, което се използва за измерване на аналита в имуноанализ.

TMB - колориметричен субстрат за пероксидаза от хрян, става син при завършване на ензимната реакция.


ELISA комплект за 25-хидроксивитамин D3 (HVD3)

  • Продукт № CEA915Ge
  • Видове организми Пан-вид (общо) Едно и също име, различни видове.

Специфичност

Този анализ има висока чувствителност и отлична специфичност за откриване на 25-хидроксивитамин D3 (HVD3).
Не се наблюдава значителна кръстосана реактивност или интерференция между 25-хидроксивитамин D3 (HVD3) и аналози.

Възстановяване

Матриците, изброени по-долу, бяха обогатени с определено ниво на 25-хидроксивитамин D3 (HVD3) и скоростите на възстановяване бяха изчислени чрез сравняване на измерената стойност с очакваното количество 25-хидроксивитамин D3 (HVD3) в пробите.

Матрица Диапазон на възстановяване (%) Средно аритметично(%)
серум (n=5) 99-105 102
EDTA плазма (n=5) 78-89 85
хепарин плазма (n=5) 93-105 98

Точност

Прецизност в рамките на анализа (Прецизност в рамките на анализа): 3 проби с ниско, средно и високо ниво на 25-хидроксивитамин D3 (HVD3) бяха тествани 20 пъти на една плоча, съответно.
Прецизност между анализите (Прецизност между анализите): 3 проби с ниско, средно и високо ниво на 25-хидроксивитамин D3 (HVD3) бяха тествани върху 3 различни плаки, 8 повторения във всяка плака.
CV(%) = SD/средно X100
Вътрешен анализ: CV

ПОДДАВАНЕ

НАРАЩАНЕ НА УСЛУГИТЕ

  • Еднокомпонентни реагенти от комплекта за анализ
  • Персонализирано обслужване на комплект ELISA

SARS-CoV-2 Нуклеопротеинов ELISA комплект

Този анализ използва количествената техника за имуноанализ с ензим сандвич. Моноклонално антитяло, специфично за SARS-CoV-2 нуклеопротеин, е предварително покрито върху микроплака. Стандартите и пробите се пипетират в ямките и след това към ямките се добавя антитяло за откриване, конюгирано с пероксидаза от хрян, специфично за SARS-CoV-2 нуклеопротеин, като се получава "сандвич комплекс" антитяло-антиген-антитяло. След стъпките на инкубация и промиване се добавя субстрат. Образува се оцветен продукт пропорционално на количеството нуклеопротеин SARS-CoV-2, присъстващ в пробата. The reaction is terminated by the addition of acid and absorbance is measured at 450nm. A standard curve is prepared from six SARS-CoV-2 Nucleoprotein standard dilutions and SARS-CoV-2 Nucleoprotein sample concentration determined.

TARGET INFORMATION

Coronaviruses are enveloped viruses with a positive-sense RNA genome and with a nucleocapsid of helical symmetry. Coronavirus nucleoproteins localize to the cytoplasm and the nucleolus, a subnuclear structure, in both virus-infected primary cells and in cells transfected with plasmids that express N protein. Coronavirus N protein is required for coronavirus RNA synthesis and has RNA chaperone activity that may be involved in template switch. Nucleocapsid protein is the most abundant protein of coronavirus. During virion assembly, N protein binds to viral RNA and leads to the formation of the helical nucleocapsid. Nucleocapsid protein is a highly immunogenic phosphoprotein also implicated in viral genome replication and in modulating cell signaling pathways. Because of the conservation of the N protein sequence and its strong immunogenicity, the N protein of coronavirus is chosen as a diagnostic tool.