Информация

8.3: Изрязване и поставяне на ДНК - Рестрикционни разграждания и ДНК лигиране - Биология

8.3: Изрязване и поставяне на ДНК - Рестрикционни разграждания и ДНК лигиране - Биология



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Рестрикционни ензими

Много бактерии имат ензими, които разпознават специфични ДНК последователности (обикновено 4 или 6 нуклеотида) и след това отрязват двойноверижната ДНК спирала в тази последователност (Фигура (PageIndex{7})). Тези ензими се наричат ​​сайт-специфични рестрикционни ендонуклеази, или по-просто “рестрикционни ензими“, и те естествено функционират като част от бактериалната защита срещу вируси и други източници на чужда ДНК. За да изрежат ДНК на известни места, изследователите използват рестрикционни ензими, които са пречистени от различни бактериални видове и които могат да бъдат закупени от различни търговски източници. Тези ензими обикновено са кръстени на бактерията, от която са изолирани за първи път. Например, EcoRI и EcoRV са и двата ензима от Е. coli. EcoRI разрязва двойноверижна ДНК в последователността GAATTC, но имайте предвид, че този ензим, както много други, не се разрязва точно в средата на рестрикционната последователност (Фигура (PageIndex{8})). Краищата на молекула, отрязани EcoRI имат надвиснала област от едноверижна ДНК и понякога се наричат ​​така лепкави краища. От друга страна, EcoRV е пример за ензим, който разрязва и двете нишки точно в средата на своята последователност на разпознаване, произвеждайки това, което се нарича тъпи краища, на които липсват надвеси.

ДНК лигиране

Процесът на ДНК лигиране възниква, когато нишките на ДНК са ковалентно свързани, от край до край чрез действието на ензим, наречен ДНК лигаза. Казва се, че имат молекули с лепкав край с комплементарни надвиснали последователности съвместими краища, които улесняват свързването им за образуване на рекомбинантна ДНК. По същия начин, две последователности с тъп край също се считат за съвместими за свързване заедно, въпреки че не се лигират заедно толкова ефективно, колкото лепкавите краища. Забележка: Молекулите с лепкав край с некомплементарни последователности няма да се лигират заедно с ДНК лигаза. Следователно лигирането е централно за производството на рекомбинантна ДНК, включително вмъкването на двойноверижен ДНК фрагмент в плазмиден вектор.


Гледай видеото: УСПЕШНО ПОСТАВЯНЕ НА КАПСИ. EYELET SETTER. VAESSEN CREATIVE. (Август 2022).